Экспрессия ПЦР

Экспрессия ПЦР * экспрэсія ПЛР * expression-PCR or e. polymerase chain reaction — методика, объединяющая полимеразную цепную реакцию (см.) с транскрипцией (см.) и трансляцией (см.) in vitro определенного фрагмента ДНК (гена), с тем чтобы получить амплифицированный продукт (белок) (Амплификация). Для этого интересующий ген сначала амплифицируют с помощью ген-специфичного смыслового и антисмыслового праймеров (см.). 51конец смыслового праймера содержит область из 12 перекрывающихся п. о. После процедуры амплификации этот участок удлиняется с помощью Taq-полимеразы (см.) путем присоединения экспрессионной кассеты (см.), содержащей сайт инициации транскрипции для Т7 РНК-полимеразы, 51-нетранслируемую лидерную последовательность из вирусного гена и стартовый кодон ATG. Лидерная последовательность (см.), в свою очередь, несет сайт для связывания с рибосомами (см.). Затем такая рекомбинантная молекула амплифицируется с помощью универсального и антисмыслового праймеров. Образующийся ПЦР-продукт in vitro транскрибируется в иРНК, а затем транслируется в белок.